1、為什么要進(jìn)行全基因合成？

最常見的獲得目的基因的方法是PCR 擴(kuò)增釣取基因。但很多的時(shí)候，擴(kuò)增只會得到痕量或根本就得不到目的基因。如果用這種方法，首先，必須準(zhǔn)備某一特定組織的cDNA文庫，就必須花時(shí)間去準(zhǔn)備或訂購。其次，目的基因在文庫中的含量必須充足，否則就可能會找不到合適的方法釣取或克隆得到。第三，PCR擴(kuò)增得到的目的基因可能會含有許多點(diǎn)突變或單核苷酸多態(tài)性，這會給您后期的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用帶來極大麻煩。

2、密碼子優(yōu)化有必要嗎？

有必要。不同來源的種屬密碼子的偏好性不同。比如，在人體內(nèi)受偏愛的密碼子對于E. coli來說可能是稀有的。

3、什么是新基因？

（1） 需經(jīng)過密碼子優(yōu)化以提高外源表達(dá)量的基因。

（2） 從組織樣品不易獲得，但序列已知的基因。 

（3） 需要特定突變的基因。

（4）無法通過釣魚法獲得的或cDNA 文庫中不表達(dá)、豐度極低、很難通過 PCR 法獲取的基因。

（5） 用于微芯片的大量cDNA。

（6）您所感興趣的、自然界中還不存在對應(yīng)蛋白表達(dá)與純化的新基因。